英文名稱：Plasmid ezFilter Megaprep 3 Kit
中文名稱 :快速過濾法質粒超大量提取試劑盒
編號:PD1611-01
規格: 2次
品牌：biomiga
佰易聚生物商城提供的分子生物學試劑和試劑盒、美國聯合碳化和美國光譜醫學透析袋、培養基和培養耗材、細胞因子和細胞分離液、抗體和elisa試劑盒及常用生物試劑等,大量現貨火爆*,歡迎登錄www.ebioeasy.com或者,，洽談選購！
| 說明 : |
| 試劑盒組分： | Catalog# | PD1611-01 | | Preps | 2 | | DNA Unit | 2 | | Filter Unit | 2 | | Replacement Cup | 2 | | Buffer A1 | 70 mL | | Buffer B1 | 70 mL | | Buffer C1 | 80 mL | | Buffer KB | 120 mL | | RNase A （20 mg/mL） | 7 mg（350µL） | | Elution Buffer | 40 mL | | User Manual | 1 | 保存條件： RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。 注意事項： - 質粒拷貝數：純化中低拷貝的質粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同體積的Wash Buffer （70% 乙醇）和Elution Buffer.
- 轉化菌：若為-70oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養后，再重新挑選新的單個菌落進行培養。
- 柱結合能力：3 mg
操作簡明步驟： - 取500 µL新鮮的菌液接種到 500 mL （勿超過 500 mL）的LB培養基（含適量抗生素），37oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入30 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
- 加入 30 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。
- 加入 36 mL Buffer C1,立即反轉幾次至出現絮狀白色沉淀。渦漩震蕩10 秒。充分混勻后，溶液將會變得顏色均一，如果此時溶液顏色不均一，均局部顏色過深，建議將溶液輕甩幾次，以充分混合溶液，室溫下靜置10分鐘。
- 將雙層Filter unit與500ml或100ml的滅菌瓶（Corning# 430518 or 430282 or equivalent） 連接，旋緊，再將此裝置與真空負壓裝置連接。
- 先將步驟“5”中底部較澄清的裂解產物用50 mL移液管轉移至雙層Filter unit中，靜置5分鐘后打開真空裝置，使負壓由低到高，5分鐘后增至zui大（0.04 Mpa）。
- 當大部分裂解液已被過濾時，關掉真空負壓裝置，等候1分種，拆卸裝置，移去雙層Filter unit。
- 再將DNA unit杯與一個新的滅菌的500ml或1000ml螺口標準瓶連接，旋緊。并將過濾嘴與真空負壓裝置連接。將步驟“7”中收集到的裂解液中加入36 ml 100%乙醇，立即混合均勻，立即將一半倒入DNA unit杯中，開啟負壓裝置，進行過濾吸附操作。
- 再將剩下一半倒入DNA unit杯中，當所有裂解液已過濾完，再維持真空1分鐘后，關掉負壓裝置。
- 在DNA Unit杯中加入50 mL Buffer KB，開啟負壓裝置至zui大（0.04Mpa）并維持1分鐘，使Buffer KB*通過DNA Unit杯。
- 在DNA Unit杯中加入50 mL 70%乙醇，開啟負壓裝置至zui大（0.04Mpa）并維持1分鐘，使乙醇*通過DNA Unit杯。重復此操作步驟一次。
- 在DNA Unit杯中加入50 mL無水乙醇，開啟zui大負壓維持1分鐘，關掉負壓裝置，倒掉瓶子中的廢液，將DNA Unit杯重新連接至標準瓶上，開啟負壓裝置至zui大負壓，真空抽20分鐘，以充分去除殘留的乙醇。
- 關掉負壓裝置，靜置一分鐘，移去標準瓶，將DNA Unit 連接至一個新的50 mL的離心管中，并旋緊。
- 加入10 mL 滅菌 ddH2O或者Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上，室溫放置2分鐘，打開負壓裝置至zui大（0.04 Mpa）洗脫DNA。此時會收集到3~5 mＬ洗脫液，這是1st 洗脫液。
- 關掉負壓裝置，將DNA Unit連接至一個新的50mL的離心管中，加入5 mL 滅菌 ddH2O或者Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上，室溫靜置2分鐘，開啟負壓裝置至zui大（0.04 Mpa）洗脫DNA。此時會收集到約3 mL洗脫液，這是2nd洗脫液。
操作流程： |
