細胞分離液的實驗標準
所需材料(不提供)
1、實驗室用蒸餾水或去離子水
2、100ml量筒
3、用于萃取樣品及收集萃取液玻璃器皿
4、濾紙,Whatman NO.4及相當者
5、可以吸取500ul溶液的吸管及一次性吸頭
6、吸水紙
7、450nm的酶標儀
8、計時器
樣品的準備
1、粉碎好的樣品過20目篩并與先前取樣*混合,不立即使用分析的樣品應放在冰箱中儲存
2、稱取20g樣品,量取100ml水到一有蓋容器中,所用的容器使用前應是封閉良好的
3、劇烈震蕩3分鐘
4、靜置2-3分鐘,使樣品沉淀
5、用Whatman1#玻璃纖維濾紙過濾15ml萃取液,收集濾液到一干凈容器中
清洗液的準備
1、將清洗濃縮倒入1L溶積的容器中,加入實驗室用蒸餾水。
2、將配好的清洗液轉移至洗瓶中
檢測程序(注意標準及樣品做重復,可以提高檢測的準確度及度)
1、開始實驗前要求試劑及樣品萃取液達到室溫
2、取適量的測試管固定在測試管架上,確定末使細胞分離液用的測試管,與干燥劑一同放入密封袋中保存。
3、加入500ul的樣品及標準品到相應的測試管中,注意使用一次性吸頭止交叉污染
4、加入500ul的酶標記物到測試管中
5、室溫下孵育10分鐘
6、倒掉微孔中溶液,測試孔中注滿清洗液,然后到掉,重復4次,共五次洗板
7、zui后一次清洗完后,倒掉孔中溶液,然后翻轉測試孔板在吸水紙上拍干
8、每個測試fermentas管中加入500ul的底物溶液
9、室溫下孵育5分鐘
10、每個測試管中加入500ul停止液
11、450nm讀吸光度值
結果判斷
1、半定時結果的判定,可根據樣品的吸光度值與標準的吸光度值來判定,樣品的吸光度值低于某個標準的吸光度值,則說明樣品的
DON含量大于此標準的NON濃度,樣品的吸光度值高于某個標準的吸光度值,則說明樣品的DON含量小于此標準的DON濃度
2、定量結果判定,需要以標準的吸光度值為X軸,標準濃度的半對數為Y軸給制曲線圖,將標準濃度抗體及吸光度值的點用直線連接,根
據樣品的吸光度值在Y軸上即可找到相應樣品的濃度,如果樣品的吸光度值大于zui大標準的吸光度值或小于zui小樣品的吸光度值,即
可說明此樣品中DON的含量大于6ppm或小于0.5ppm。另外,也可應用Beacon公司提供的Excel軟件來計算