牛上皮細(xì)胞抗菌肽的分離純化
牛抗菌肽共有13種，主要包括[5-6]牛β-防御素上皮抗菌肽、舌抗菌肽、腸上皮細(xì)胞抗菌肽，即腸肽素及牛肽聚糖識(shí)別蛋白） Diamond G等[7]從牛氣管黏膜分離得到TAP，它是從哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞分離純化得到的*個(gè)抗菌肽，TAP的發(fā)現(xiàn)為其他的哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞抗菌肽的發(fā)現(xiàn)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。Tarver A P等[8]從牛小腸分離純化得到牛腸肽素，其方法為采集牛小腸，液氮凍存，－70 ℃保存?zhèn)溆谩?br />
粗提制備：剪碎，研磨，勻漿，用100 mL/L乙酸過(guò)夜攪拌浸提，過(guò)濾，液體用1 mol/L硫酸銨沉淀，離心，上清液濃縮即得粗提。純化采用3步色譜技術(shù)，*步凝膠過(guò)濾色譜，生物凝膠P-30，排阻極限40 ku），2. 0 cm×30 cm 的柱子，用50 mmol/L的乙酸銨（pH 4.1）平衡、2.5 mL/min流速洗脫，收集、冷凍干燥并做抑菌試驗(yàn)。
有活性部分進(jìn)行陽(yáng)離子交換色譜，用330 g/L KH2PO4溶液平衡，0 mol/L～1 mol/L的NaCl線性梯度洗脫，收集冷凍干燥。將有抗菌活性的部分進(jìn)行第三步分離純化，反相高壓液相色譜，0.46 cm×22 cm C18反相柱，平衡1 mL/L三氟乙酸（TFA）水溶液，洗脫1 g/L TFA/乙腈，乙腈梯度0 mL/L～850 mL/L，洗脫速度1 mL/min，收集進(jìn)行活性檢測(cè)、分子量鑒定及序列測(cè)定。
Aono S等[9]從牛乳腺上皮細(xì)胞克隆到一種新的牛β-防御素，并進(jìn)行真核細(xì)胞表達(dá)。重組表達(dá)蛋白用CM Macro-Prep樹(shù)脂進(jìn)行純化，純化抗菌肽進(jìn)行質(zhì)譜分析，氨基酸測(cè)序。BPGRPs的純化則先將粗提產(chǎn)物采用10 cm× 25 cm C18 catridge進(jìn)行濃縮，再用RP-HPLC進(jìn)行純化，平衡1 mL/L TFA水溶液，洗脫1 mL/L TFA/乙腈，乙腈梯度0 mL/L～420 mL/L[10]。
透析袋,細(xì)胞分離液,抗體,細(xì)胞因子,fermentas,wako,
