用中性粒細胞分離液提取中性粒細胞過程
更新時間:2016-07-21 點擊:4167
銷售直線:021-31322331、一、實驗所需材料:
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1、中性粒細胞分離液(histopaque)
2、全血
3、Hanks液
4、離心管若干
5、離心機
6、移液管,移液搶
二、實驗步驟
1. 將所有試劑放至室溫。
2、用離心管收集全血1-2ml
3、加等體積的Hanks液至全血中組成
4、加2ml中性粒細胞分離液至裝至離心管中。
5、將全血和Hanks液加入分離液中
6、4℃,900r/min離心8-10min血液此時應該分為6層:血漿、單核細胞層、分離液、中性粒細胞、其余的分離液、紅細胞沉淀層。如果分層不是很明顯,會導致分離的細胞不純,則需要重復分離。
7、用吸管小心地移去上面的三層(血漿、單核細胞和分離液)
8、小心地吸取中性粒細胞層和其下面的分離液層,轉移至一個干凈的離心管中。
9、加Hanks液3ml,后4℃,900r/min離心8-10min,棄上清,留沉淀,重復2次。
10、如果細胞用來提RNA,可加Trizol 1ml保存。
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