組織單細胞懸液的制備方法
組織單細胞懸液的制備方法
注：A.組織勻漿液需現用現配，配制方法為：20%標準胎牛血清（產品編號：TBD31HB）
與 80%F 液（產品編號：F2013TBD）混勻，備用。
B．本試劑盒中不包含膠原酶，若采用酶消化法制備單細胞懸液，請用戶根據各實驗室要求另購不同類型膠原酶。
1.剪碎法：
（1） 將組織塊放入平皿后，加入少量組織勻漿液；用眼科剪將組織剪至勻漿狀，加入 5ml
組織勻漿液。
（2） 用吸管吸取組織勻漿，用 200 目不銹鋼濾網(另購)過濾到離心管內。
（3） 沉淀以 450-500g 離心 15 分鐘，棄上清。
（4） 用含 80%標準胎牛血清（產品編號：TBD31HB）的樣本稀釋液（產品編號：2010C1119）， 懸浮沉淀成細胞濃度為 2×108–1×109/ml 的單細胞懸液備用。
2.勻漿器法：
（1） 用眼科剪將組織剪成小塊；放入 70ml 組織研磨器內，加入 2ml 組織勻漿液；緩慢轉動研 棒，研磨至勻漿。
（2） 用 5ml 組織勻漿液沖洗研器；收集細胞懸液，經 200 目不銹鋼濾網（另購）過濾到離心管 內。
（3） 沉淀以 450-500g 離心 15 分鐘，棄上清。
（4） 用含 80% 標準胎牛血清（產品編號： TBD31HB ）的樣本稀釋液（產品編 號：2010C1119），懸浮沉淀成細胞濃度為 2×108–1×109/ml 的單細胞懸液備用。
3.酶消化法：
（1） 用 F 液（產品編號：F2013TBD）將膠原酶稀釋，終濃度為 400U/ml，至于冰浴備用。
（2） 取一適當大小培養皿進行操作：用鑷子夾碎動物脾臟，加入稀釋后的膠原酶，37℃
消化 20 分鐘。
（3） 以 200 目不銹鋼濾網（另購）過濾到離心管內。
（4） 沉淀以 450-500g 離心 15 分鐘，棄上清。
（5） 用含 80% 標準胎牛血清（產品編號： TBD31HB ）的樣本稀釋液（產品編 號：2010C1119），懸浮沉淀成細胞濃度為 2×108–1×109/ml 的單細胞懸液備用。
