弗氏*佐劑介紹
弗氏*佐劑是一種油包水的乳濁液，能夠非常有效的誘導產生高滴度的抗體。弗氏*佐劑含結核分枝桿菌的細胞壁成分，可以加強對抗原的抗體反應。佐劑活性來自于油滴中免疫原的持續釋放，并刺激局部免疫反應。簡單的說，這個注射入哺乳動物皮下之后，會產生炎癥和疼痛。
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弗氏佐劑是現在動物實驗中zui常用的佐劑，分為不*弗氏佐劑和*弗氏佐劑。不*弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成，組分比為1～5：1，可根據需要而定，通常為2：1。不*佐劑中加卡介苗(zui終濃度為3～20mg/ml)或死的結核分枝桿菌，即為*弗氏佐劑（FCA）。 一般注射時用1/2體積FCA加上1/2體積的抗原進行乳化，第二次或第三次注射時用不*佐劑或不用佐劑。如不加佐劑，則抗原量增大10-20倍。[1]
配制方法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內，用超聲波使之混勻，高壓滅菌，置5℃下保存備用。
在免疫動物前，先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合，佐劑和抗原體積比一般為1：1，制備成 "油包水"乳狀液。因為含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化復合物，注射入動物體內時一定要保持乳化狀態。抗原用量視抗原分子量不同及免疫原性及免疫動物不同而有一定差異，無統一標準和固定模式。一般是每兔（約2kg重）或每羊（約20kg重）第1次注射抗原2mg，以后逐次增加抗原量，zui多每次不超過3mg。佐劑與抗原乳化可按如下方法進行：
（1） 研磨法：先將佐劑加熱并取適量放入無菌的玻璃研缽內，待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液，邊滴邊按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，繼續研磨一段時間，使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適于制備大量的佐劑抗原，缺點是研缽壁上粘附大量乳劑，抗原損失較大。
（2） 注射器混合法：將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個注射器內，兩注射器之間以一細膠管相連，注意排凈空氣，然后交替推動針管，直至形成粘稠的乳劑為止。本法優點是容易做到無菌操作，抗原損失少，適用于制備少量的抗原乳劑。但同時難以乳化*，個別抗原，用塑料注射器根本推不動，而用玻璃注射器又有滲漏。制備好的乳化劑經鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴狀浮于水面，即乳化*，為合格的油包水劑。
（3） 超聲：實驗室條件好點的，比如說有超聲破碎儀的，一定要控制超聲頻率和時間，超聲容易激發一些自由基，對抗原有未知損害。乳化方法要根據抗原和需要而定。
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其他免疫佐劑的物質
弗氏佐劑也屬于免疫佐劑。其他免疫佐劑的物質有：①微生物及其產物，常用的微生物有分枝桿菌、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌以及處左蘭氏陰性桿菌的提取物脂多糖，自分枝桿菌的提取物質胞壁酰二肽等。②多聚核苷酸，如多聚肌苷酸：胞苷酸（poly1:C）,多聚腺苷酸（poly1:A：μ）等;。③無機物，如明礬及氫化鋁等。
佐劑的作用機制尚不*清楚：①它可能增加抗原的表面面積，易為巨噬細胞所吞噬；②延長抗原在體內的存留期，增加與免疫細胞接觸的機遇；③誘發抗原注射部位及其局部淋巴結的炎癥反應，有利于刺激免疫細胞的增殖作用。
