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96孔板血液gDNA小量提取試劑盒實驗細則

更新時間:2013-01-08      1648

 

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備注:本公司銷售的所有產(chǎn)品僅用于生化科研試驗

產(chǎn)品名稱 :
 96孔板血液gDNA小量提取試劑盒
品牌 :
 BIOMIGA
貨號 :
 GD2815-01
規(guī)格 :
 4*96/20*96/20*96

詳細資料:

圖片:

開始之前
 
請閱讀完整的手冊,以熟悉的EZgene TM 96孔的血液DNA試劑盒過程。
1。準備一個足夠的的洗脫緩沖和分裝成部分的蛋白酶K原液。存儲每個等分試樣在-20℃下,在使用前解凍。每個樣品,將要求25μL該溶液。
升  GD2815-00溶解洗脫緩沖液2.5毫升
升  GD2815-01與10 mL的洗脫緩沖液溶解
升  GD2815-02溶解50.0毫升洗脫緩沖液
2。如下,儲存在室溫下用無水乙醇稀釋DNA濃縮洗滌緩沖液。
升  GD2815-00加入160毫升(96%-100%)乙醇
升  GD2815-01加入640毫升(96%-100%)乙醇
升  GD2815-02加入乙醇,每瓶640毫升(96%-100%)
3。預熱洗脫緩沖液在65℃下
4。調(diào)整到250μL的樣品的體積。小于250μL的樣品,加入適當體積的PBS 250μL。對于大于250μL的樣品,每個樣品拆分成兩個取250μL,并使用1.2 mL圓底孔板溶解的兩口井。到96孔DNA板的各孔中裝入合并的溶胞產(chǎn)物。
 
儲存的血液樣本
沒有以前的治療的血液樣本的存儲導致產(chǎn)量減少的基因組DNA。的結(jié)果,血標本應作如下處理,
l對于短期存儲(一個星期),在含有EDTA抗凝管收集血液,并儲存于4°C。
l對于長期儲存,收集管中的血液中含有一種抗凝血劑,并儲存在-70°C。解凍冷凍血液樣本,在37°C,使用前輕輕攪拌。
 
EZgene TM 96 - 血液DNA協(xié)議
 
1。免除25 μL 蛋白酶K(20 毫克/毫升),每孔1.2 mL圓底孔板的底部。每個樣品標記的位置。
2。井的內(nèi)部,而不接觸輪輞與前端部(zui多6 x 10 6淋巴細胞或培養(yǎng)的細胞在PBS中可以通過觸摸到圓形孔深孔板的各孔中添加250μL的全 血,血清或體液各孔中使用)。
注:樣品體積小于或大于250μL,調(diào)整樣品體積250μL PBS(開始之前第4頁上的詳細信息,請參閱“)。
3。每個樣品中加入250μL緩沖液BL避免接觸的輪輞井的提示,這可能會導致交叉污染。可選:添加5μL核糖核酸酶A每口井每250μL 緩沖液BL添加緩沖BL /核糖核酸酶A組合,以每口井。
4。密封圓形孔板上限(提供)*混合樣品,振蕩30秒或用力搖動板(邊到邊)。
注意:搖動機架一側(cè)到另一側(cè)。為了防止可能出現(xiàn)的泄漏周圍微管帽,不搖板和失望。
5。在2000 XG短暫離心收集任何樣本,帽子。
6。孵育樣品在65℃的培養(yǎng)箱中或烤箱10分鐘。混合孵化過程中偶爾輕輕地旋轉(zhuǎn)板。
注意:切勿劇烈振蕩的樣品超過20分鐘。
7。在2000年XG短暫離心收集任何解決方案,從帽。取出微管帽。向每孔中加入2 6 0μL 的無水乙醇(96-100%) 。
8。密封圓形孔板使用新上限(提供)。
9。將樣品混合,通過渦旋或用力搖動1分鐘的板(從一側(cè)到另一側(cè))。在2000年XG短暫離心收集任何液體的上限。
10。將DNA板頂部的2毫升96孔收集板(提供)。馬克的96孔DNA板,以便后面識別。
11。傳輸從步驟10到96孔DNA板的各孔中的所有樣品。
12。用密封膜密封的96孔DNA板。離心在5000 XG 5-10分鐘。確保所有的樣品已通過膜的DNA板的各孔中。
13。丟棄流過的96孔收集板。刪除的粘合膜的蓋子,然后在各孔中添加400μL緩沖液KB。
14。密封板與新的密封膜,并在5000×g離心5分鐘,然后離心處理,以使板。丟棄流過的96孔收集板。
15。取出的密封膜的蓋子,然后在各孔中添加700μLDNA洗滌緩沖液
DNA洗滌緩沖液濃縮物和被提供作為瓶或第4頁上所示,必須用無水乙醇稀釋。如果是冷藏保存,稀釋的洗滌緩沖液必須冷卻至室溫后再使用。
16。密封板與新的密封膜,并在3000-5000 xg離心5分鐘,然后離心處理,以使板。丟棄的流量,通過在96孔收集板。
17。卸下粘接膜蓋和在各孔中添加600μLDNA洗滌緩沖液。將DNA的2毫升收集板的頂部板96孔,96孔DNA板密封與 ??一個新的密封膜和離心機在馬克西速度(5,000 xg離心)10分鐘。
18。取出的密封膜,并在真空烘箱中或在70℃的培養(yǎng)箱預置為8分鐘,干燥膜孵育96孔DNA板。
注意:這些干燥步驟用于除去的微量乙醇,否則可能會干擾與下游應用是至關(guān)重要的。
19。將96孔DNA板之上的新的安裝機架的微管(附帶)。添加200μL洗脫緩沖液在65℃下預熱96孔DNA板的各孔中。兩到四分鐘,在室溫下孵育,或在孵化器設定在65℃的一到兩分鐘。
20。與一個新的密封膜密封96孔DNA板和離心處理,以使板在5,000 xg離心5分鐘,以洗脫DNA。
注: *次洗脫通常會產(chǎn)生60%-70%的DNA綁定到列。另外200μL洗脫緩沖液可以產(chǎn)生另外的20%。 低于50μL的卷,大大降低了產(chǎn)量。

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