石蠟及冰凍切片的制備（轉(zhuǎn)）
備注：本公司銷售的所有產(chǎn)品僅用于生化科研試驗(yàn)
◆ 標(biāo)本收集
對(duì)于石蠟包埋的組織，活檢或手術(shù)切除標(biāo)本應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)取材或固定，避免組織自溶及抗原變性等影響免疫組化結(jié)果。對(duì)于冰凍切片的組織，取材后應(yīng)立即放入液氮冷凍，然后放入-80℃保存。取材時(shí)應(yīng)保持所檢標(biāo)本原有的結(jié)構(gòu)、形態(tài)，為避免擠壓組織，盡量使用鋒利刀片，并且避開壞死組織，除取病灶或含待檢抗原部位外，還應(yīng)取病灶與正常交界處，即所取組織切片中同時(shí)應(yīng)有抗原陽性和陰性區(qū)，以形成自身對(duì)照。
◆ 常用固定液
1．單純固定液
● 4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能滿足常規(guī)HE及免疫組化、PCR等工作。一般無特殊要求的病理標(biāo)本均適用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以pH 7.2～7.4的磷酸緩沖液為溶劑配制的，其固定效果及對(duì)組織抗原性的保存均優(yōu)于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后應(yīng)密封并保存在陰涼處，保存時(shí)間不超過一個(gè)月。
--甲醛（40%） 100 ml
--無水磷酸氫二鈉 6.5 g
--磷酸二氫鈉 4.0g
--蒸餾水 900 ml
● 乙醇固定液：使用時(shí)以80％～95％的濃度為宜，具有硬化、固定、脫水等作用，對(duì)組織滲透力較弱，因此很少單獨(dú)使用，但其保存組織中的核酸強(qiáng)于中性甲醛，故常用于有核酸操作的實(shí)驗(yàn)或檢查，如果用于證明尿酸結(jié)晶和保存糖原，可用100%乙醇固定組織。
● 4％的多聚甲醛：主要用于培養(yǎng)細(xì)胞的固定，動(dòng)物灌注固定及后固定（動(dòng)物器官經(jīng)該液灌注后，然后取材，再用該液浸泡2～24小時(shí)）也常選該固定液固定。
2．混合固定液
● 乙醇一甲醛（乙醇-福爾馬林，AF）固定液：適用于皮下組織中肥大細(xì)胞的固定。該固定液有固定兼脫水作用，固定后的標(biāo)本可直接入95％乙醇脫水。
--甲醛（40％） 100 ml
--95％乙醇 900 ml
● B5（醋酸鈉-升汞-甲醛）固定液：多用于固定淋巴組織。染色前應(yīng)進(jìn)行脫汞沉淀處理。
--無水醋酸鈉 1.25 g
--升汞 6.0 g
--蒸餾水 90 ml
--使用前加入甲醛 10 ml
● Bouin固定液：特別適用于睪丸活檢組織的固定。Bouin液對(duì)組織固定較均勻，收縮很少，不會(huì)使組織變硬變脆。需現(xiàn)配現(xiàn)用。
--飽和苦味酸水溶液（約1.22%） 75 ml
--甲醛 25 ml
--冰醋酸 5 ml
● Carnoy固定液：穿透能力強(qiáng)，可很好的固定細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，特別適合于固定外膜致密的組織，亦適用于糖原及尼氏小體的固定。
--無水乙醇 60 ml
--氯仿 30 ml
--冰醋酸 10 ml
● Zenker固定液：經(jīng)此液固定的標(biāo)本，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)染色頗為清晰，但成本較昂貴且需特殊處理汞。該固定液要避免接觸陽光，以免引起化學(xué)變化而失效。
--升汞 5.0 g
--重鉻酸鉀 2.5 g
--硫酸鈉 1.0g
--蒸餾水（加至） 100 ml
◆ 蠟塊制備
● 固定（對(duì)于石蠟包埋的組織，一般用4％的多聚甲醛固定液。對(duì)于冰凍組織，一般采用冰凍丙酮，但對(duì)于不同的組織和抗原，可選用不同的固定液，應(yīng)根據(jù)具體情況而定）；
● 脫水浸蠟（75％乙醇90～120min，85％乙醇90min，95％乙醇Ⅰ40min，95％乙醇Ⅱ40min，，無水乙醇Ⅰ30min，無水乙醇Ⅱ30min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各15min（可視觀察結(jié)果而定），石蠟Ⅰ60min，石蠟Ⅱ60min）；
● 包埋（鐵板架包埋或其他容器，有時(shí)要求快速冷卻。）
◆ 石蠟切片
連續(xù)切片，切片厚2～4μm，按序貼在玻片的下1/3。52～60℃烤片18h。切片可在4℃保存數(shù)年（石蠟切片）。
◆ 冰凍切片
將術(shù)中送檢組織取材后，置于恒冷箱冰凍切片機(jī)切片架上，待組織塊冷凍變硬后切片，厚度為3～7μm。將切片貼附在載玻片上，空氣中稍風(fēng)干（1～2min），后放入固定液中固定。
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