淋巴細(xì)胞分離液使用說(shuō)明
更新時(shí)間：2011-03-09 954
使用說(shuō)明
1.在離心管中加入適量淋巴細(xì)胞分離液。
2.取抗凝血與等量Hank’s液或平衡鹽溶液充分混勻，用滴管沿管壁緩慢疊加于分層液面上，注意保持兩液面界面清晰，水平離心2000rpm×20分鐘。
3.離心后，管內(nèi)液體分為三層，上層為血漿和Hank’s液，下層主要為紅細(xì)胞和粒細(xì)胞。中層為淋巴細(xì)胞分離液，在中上層液面處有一白色云霧層狹窄帶，即為富含淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）及血小板。
4.吸去zui上層的血漿，收集血漿層和淋巴細(xì)胞分離液交界面的單個(gè)核細(xì)胞，盡量全部吸出PBMC，移入一新的離心管中；
2.取抗凝血與等量Hank’s液或平衡鹽溶液充分混勻，用滴管沿管壁緩慢疊加于分層液面上，注意保持兩液面界面清晰，水平離心2000rpm×20分鐘。
3.離心后，管內(nèi)液體分為三層，上層為血漿和Hank’s液，下層主要為紅細(xì)胞和粒細(xì)胞。中層為淋巴細(xì)胞分離液，在中上層液面處有一白色云霧層狹窄帶，即為富含淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）及血小板。
4.吸去zui上層的血漿，收集血漿層和淋巴細(xì)胞分離液交界面的單個(gè)核細(xì)胞，盡量全部吸出PBMC，移入一新的離心管中；
5.加入Hanks’液或無(wú)血清培養(yǎng)液，混勻后離心200×g 10分鐘，棄去上清液（低速離心有利于去除細(xì)胞懸液中留存的血小板）。
6.再用同樣洗滌液洗滌細(xì)胞2次，每次離心500×g 10分鐘，以洗去殘留的淋巴細(xì)胞分離液。再用細(xì)胞分離液將細(xì)胞調(diào)配成適當(dāng)濃度。通常，每毫升外周血可得1～2×106PBMC
