人富含NK活性大顆粒淋巴細(xì)胞（LGL）的純化試劑盒實(shí)驗(yàn)方法
人富含 NK 活性大顆粒淋巴細(xì)胞(LGL)的純化試劑盒實(shí)驗(yàn)方法
【產(chǎn)品規(guī)格】
100ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
| 名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 |
A | 密度梯度分離液原液 | NK2011H-A | 100ml |
B | 梯度制備稀釋液 | NK2011H-B | 100ml |
C | 說(shuō)明書 |
| 1份 |
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
適用儀器：zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
【檢驗(yàn)方法】
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
1. 收集從外周血中分離的單個(gè)核細(xì)胞（人全血單個(gè)核細(xì)胞分離液，產(chǎn)品貨號(hào)；LDS1075）： 1×108 個(gè)懸于 1ml 無(wú)血清培養(yǎng)基中。
2. 梯度分離溶液制備，使用使用梯度制備稀釋液參考下表將原液稀釋至所需濃度：
原液濃度（%） | 83% | 79% | 73% | 70% | 66% |
比重（g/ml） | 1.067 | 1.064 | 1.061 | 1.058 | 1.056 |
3. 梯度分離層的制備：將梯度分離液由高密度至低密度逐層加入至 10ml 離心管（試管）內(nèi)，每層約 1.2-1.5ml 加入后應(yīng)可見(jiàn)明顯的梯度界面，同時(shí)標(biāo)記 70%層上部界面及 73% 底部界面位置。
4. 上樣：將單個(gè)核細(xì)胞單細(xì)胞懸液 1ml 加至梯度界面上。
5. 離心：400g，離心 20-25min。
6. 取樣：吸取 73%與 70%溶液界面及上下兩層分離溶液（即步驟 3 標(biāo)記位置之間的溶液），
細(xì)胞經(jīng)洗滌后供后續(xù)試驗(yàn)。
注：樣本量加大時(shí)請(qǐng)客戶按選取對(duì)應(yīng)耗材且按比例增加試劑用量，但應(yīng)注意加入試劑及樣本
后總體積不超過(guò)離心管總體積的 2/3。
【注意事項(xiàng)】
1. 實(shí)驗(yàn)全過(guò)程需在 20℃±2℃下進(jìn)行，否則影響離心效果。
2. 由于多層分離溶液之間密度差別不大，因此離心機(jī)加速、降速時(shí)要慢，要平穩(wěn)。
3. 試劑瓶蓋需蓋緊，防止蒸發(fā)和污染。
【儲(chǔ)存條件及有效期】常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
