大（小）鼠外周血中性粒細胞分離液 KIT 說明書
大（小）鼠外周血中性粒細胞分離液 KIT 說明書 大（小）鼠外周血中性粒細胞分離液 KIT 說明書
【產品規格】
200ml/Kit
【產品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內容如下：
| 名稱 | 產品編號 | 規格 |
A | 中性粒細胞分離液試劑 A |
| 200ml |
B | 樣本稀釋液 | 2010C1119 | 200ml |
C | 清洗液（贈品） | 2010X1118 | 200ml |
D | 紅細胞裂解液（贈品） | NH4CL2009 | 100ml |
E | 紅細胞沉降液（6%羥乙基淀粉） | HES-TBD550-80 | 80ml |
F | 說明書 |
| 1 份 |
【實驗前準備】
適用儀器：zui大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
1取一支 15ml 離心管，先加入中性粒細胞分離液試劑 A：3ml，后加入 80%濃度試劑 A溶液（中性粒細胞分離液試劑 A：樣本稀釋 液=4：1 的混合液）：1.5ml，形成梯度界面。
2制備血液樣本：抗凝血液與紅細胞沉降液按 1：1 比例混勻后，小心加于分離液梯度界面之上，800g 離心 20min。
3離心后，血漿層下出現兩層白色環狀細胞層，取下層白色環狀中性粒細胞層（會有少量紅細胞混雜），加 3-5 倍體積清洗液混勻，400g 離心 10min。
4離心后棄上清，后可通過兩種方法去除紅細胞。
方法一：細胞沉淀用紅細胞裂解液去除紅細胞（具體方法參見“紅細胞裂解液說明書”）。
方法二：
1細胞沉淀用 1ml 紅細胞沉降液重懸，加于 3ml 中性粒細胞分離液試劑 A 之液面上，400g 離心 20min。
2取白色環狀細胞層，加 3-5 倍體積清洗液混勻，250g 離心 10min，重復洗滌 2-3 次，獲得目的細胞（如仍有少量紅細胞混雜，使用紅細胞裂解液去除紅細胞）。
【注意事項】
1全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得*的實驗結果，在取血 2h 內進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。
2本實驗不使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。
3分離液用量大于血液樣本時，分離效果更佳。
4請勿使用具有紅細胞保護成分的抗凝劑，否則影響分離效果（離心后，紅細胞不能*沉至離心管底部）。
【儲存條件及有效期】
18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。
【相關實驗技術方案】
1所獲得中性粒細胞的培養技術。
2所獲得中性粒細胞的核酸提取技術。
3所獲得中性粒細胞的鑒定方法
A.流式細胞技術
B.免疫組化技術
C.原位雜交技術
D.PCR 技術
【可能存在的問題及解決方法】
1.由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
出現情況 | 出現原因 |
| 建議解決方案 |
|
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉速過小或離心時間過短 | 適當增減轉速 |
| |
離心后目的細胞存在于分離液中 | 轉速過大或離心時間過長 |
| ||
|
| |||
| 離心后白環層彌散 | 細胞密度過大 | 調整細胞密度 |
|
| 離心后白環層太淺或看不見 | 細胞密度過小 |
| |
|
|
|
?2本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時，恒定離心時間，對離心轉速進行調整。
3本分離液依照標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產同類產品略有不同，可能出現紅細胞沉降不*的情況，可以適當加大離心轉速。
注：在對離心條件進行調整時，離心轉速的加減以 50-100g 為基數，直至達到*分離效果，離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。
